基于转录组学和蛋白质组学的高海拔肺动脉高压毒素模型的新靶点

肺动脉真空（PH）是指正常时平均肺动脉压≥25 mmHg。 它根据血流动力习特征、发病的系统和病理习分为五类。 第三类半沙漠肺动脉真空（HAPH）是由于在半沙漠脱水生态系统中都肺呼吸存量代偿持续性增加和肺微血管外周引起的，所致山地区心肌病。 诊断症状以外运动持续性晕眩、头痛和疲惫。 HAPH 似乎反映了未能适应半沙漠，并伴有不确切的病理生理的系统。 大约有 1.4 亿人生活在海拔 2,500 米以上的南部，每年有有约 4,000 数百人到访这些半沙漠南部。 脱水所致器官mRNA谱发生差异变化； 这是从长期居住在半沙漠南部的村民及其后代的性状适应持续性变化中都得知的。HAPH 的病人仍在科习研究中都。应要求病征移至低海拔南部，氧疗理论上。用药病人的科习研究仅限于一些随机试验。 HAPH 的病理与其他各种类型的 PH 相互似，因此值得回避对 PAH 理论上的用药是否对 HAPH 理论上。

然而，所有这些基因表达用药都在HAPH中都的理论上持续性和的系统唯不确切。为了解决这个疑问，我们旨在科习研究脱水所涉及的化习键的系统，适用家兔 HAPH 模型，并应用示范的大习方法。 在此全过程中都，我们旨在科习研究几种基因表达用药和复氧的作用，以确定半沙漠引起的脱水的潜在新病人靶点。 特别是，我们科习研究了基因表达用药如何冲击器官相互间的差异基因和RNA表达。

科习研究设计：

将家兔置于 10% O2（脱水）室中都 3 周以产生 PH。解读家兔（C 组）在整个实验中都都西北面常氧生态系统下，并在病人期间（即从第 21 天开始）用表征开展病人。 3周时，其余家兔随机分为的大；一组被处决（第 21 天）以评估急救系统会。其余 5 组用基因表达用药或复氧病人，从第 21 天到第 35 天处决。慢持续性脱水，表征检视（M）；慢持续性脱水，司来帕格病人；慢持续性脱水，劳森替坦病人；慢持续性脱水，riociguat 病人；慢持续性脱水、复氧 (RE)。

mRNA组科习研究：

提取总 RNA，并通过适用 Arraystar rRNA Removal Kit 去除 rRNA 来富集 mRNA 和非解码 RNA。 mRNA 和非解码 RNA 被录像化缓冲液分解成影录像（~200-500 nt）。以影录像为模板，借助随机六聚体引物合成第一多肽cDNA。在第二多肽合成全过程中都，dTTP 被 dUTP 取代。 然后加入洗脱缓冲液以通过末端修复和添加腺嘌呤来化习合成和分离出来影录像。 影录像被化习合成并与接头联接； 适用尿嘧啶-N-糖基化肽消化第二条多肽。 琼脂糖凝胶电泳后，可选择合适的录像作为模板开展PCR扩增。 适用 Agilent 2100 生物科习研究仪和 ABI StepOnePlus 实时 PCR 系统会对容器库开展定存量和质存量评估。 该单行本适用 Illumina HiSeq 2000 系统会开展人类基因组计划。

LC-MS/MS 科习研究

在联接到 Easy-nLC 1000 液相互色谱系统会的Q Exactive HF 质谱仪上科习研究容器。将干燥的肽容器重新溶解在溶剂 A（0.1% 硫酸硫酸）中都并载入到捕集柱中都适用溶剂 A 的最大担忧为 280 bar，然后在自制的 150 μm × 30 cm 乳胶微柱上以 5–35% 的通量开展分离出来流动相互 B（乙腈和 0.1% 硫酸），流速为 600 nl/min，持续 150 分钟。 QE HF 的 MS 科习研究是在 3e6 氯离子的自动增益控制目标下开展一次仅有追踪，然后开展上百 30 次与数据相互关的 MS/MS 追踪具有更高能存量的碰撞解离，在 Orbitrap 中都探测到（R = 15,000 在 200 m/z）。

科习研究结果：

基于RNA-seq数据的共表达网络服务的系统会富集科习研究和枢纽化习键确认。

基于RNA数据的共表达网络服务的系统会富集科习研究和枢纽化习键确认。

RNA-seq 和RNA组习揭示了对三种用药的反应相互间的强相互关持续性，具有大部分相互同的效果。GO 富集揭示差异表达的基因以外投身于代谢物调节、mRNA和转译的基因。

司来帕格、劳森替坦和复氧可改善 HAPH。Serpina1、Cryz 和 Cmc1 被确认出来，通过的大习抽样，作为投身于HAPH的更为重要基因。这些挖掘出为 HAPH 的基因表达用药的系统提供了新的见解。

科习研究结论：

Selexipag、macitentan 和复氧显着减弱了家兔 HAPH 模型，而 riociguat 的作用较弱。 差异表达的基因投身于代谢物调控、mRNA和转译。 某些RNA受到 HAPH 和病人的冲击。 我们适用的大习方法抽样了更为重要基因 Serpina1、Cryz 和 Cmc1。 这些挖掘出似乎有助于更快地了解脱水所涉及的化习键的系统，并似乎提供新的病人靶点。

文献引自：

Xu X, Li H, Wei Q, Li X, Shen Y, Guo G, Chen Y, He K, Liu C. Novel Targets in a High-Altitude Pulmonary Hypertension Rat Model Based on RNA-seq and Proteomics. Front Med (Lausanne). 2021 Nov 3;8:742436. doi: 10.3389/fmed.2021.742436. PMID: 34805208; PMCID: PMC8595261.